熒光分光光度計基本原理及構成

由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中，激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光，熒光經(jīng)過(guò)濾過(guò)和反射后，被光電倍增管所接受，然后以圖或數字的形式顯示出來(lái)。

物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài), 這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩定的,在返回基態(tài)的過(guò)程中將一部分的能量又以光的形式放出，從而產(chǎn)生熒光．

不同物質(zhì)由于分子結構的不同,其激發(fā)態(tài)能級的分布具有各自不同的特征，這種特征反映在熒光上表現為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜；，因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來(lái)定性地進(jìn)行物質(zhì)的鑒定。

在溶液中，當熒光物質(zhì)的濃度較低時(shí),其熒光強度與該物質(zhì)的濃度通常有良好的正比關(guān)系,即IF=KC,利用這種關(guān)系可以進(jìn)行熒光物質(zhì)的定量分析,與紫外-可見(jiàn)分光光度法類(lèi)似，熒光分析通常也采用標準曲線(xiàn)法進(jìn)行。

 

熒光分光光度計構成

1．激發(fā)單色器：置于光源和樣品室之間的為激發(fā)單色器或*單色器，篩選出特定的激發(fā)光譜。

2. 光源：為高壓汞蒸氣燈或氙弧燈，后者能發(fā)射出強度較大的連續光譜，且在300nm～400nm 范圍內強度幾乎相等，故較常用。

3．發(fā)射單色器：置于樣品室和檢測器之間的為發(fā)射單色器或第二單色器，常采用光柵為單色器。篩選出特定的發(fā)射光譜。

4． 樣品室：通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成。測量液體時(shí)，光源與檢測器成直角安排；測量固體時(shí)，光源與檢測器成銳角安排。

5． 檢測器：一般用光電管或光電倍增管作檢測器?？蓪⒐庑盘柗糯蟛⑥D為電信號。