熒光分光光度計的種類(lèi)及基本原理

熒光分光光度計的種類(lèi)及基本原理

熒光分光光度計的發(fā)展經(jīng)歷了手控式熒光分光光度計，自動(dòng)記錄式熒光分光光度計，計算機控制式熒光分光光度計三個(gè)階段；熒光分光光度計還可分為單光束式熒光分光光度計和雙光束式熒光分光光度計兩大系列。其他的還有低溫激光Sh p ol’skill熒光分光光度計，配有壽命和相分辨測定的熒光分光光度計等。

熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數，從各個(gè)角度反映了分子的成鍵和結構情況。通過(guò)對這些參數的測定， 不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構象變化， 從而闡明分子結構與功能之間的關(guān)系。熒光分光光度計的激發(fā)波長(cháng)掃描范圍一般是190~650nm，發(fā)射波長(cháng)掃描范圍是200~800nm?？捎糜谝后w、固體樣品（如凝膠條）的光譜掃描。

熒光分光光度計基本原理

由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中，激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光，熒光經(jīng)過(guò)濾過(guò)和反射后，被光電倍增管所接受，然后以圖或數字的形式顯示出來(lái)。

物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài), 這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩定的,在返回基態(tài)的過(guò)程中將一部分的能量又以光的形式放出，從而產(chǎn)生熒光．

不同物質(zhì)由于分子結構的不同,其激發(fā)態(tài)能級的分布具有各自不同的特征，這種特征反映在熒光上表現為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜；，因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來(lái)定性地進(jìn)行物質(zhì)的鑒定。